{"id":459,"date":"2021-12-22T19:45:58","date_gmt":"2021-12-22T19:45:58","guid":{"rendered":"https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/?p=459"},"modified":"2022-02-08T20:23:29","modified_gmt":"2022-02-08T20:23:29","slug":"clase-digital-17-sesion-de-laboratorio-reaccion-en-cadena-de-la-polimerasa","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/clase-digital-17-sesion-de-laboratorio-reaccion-en-cadena-de-la-polimerasa\/","title":{"rendered":"Clase digital 17. Sesi\u00f3n de laboratorio. Reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa"},"content":{"rendered":"\n\n\n<div class=\"wp-block-cover is-light\" style=\"min-height:284px;aspect-ratio:unset;\"><span aria-hidden=\"true\" class=\"has-background-dim-40 wp-block-cover__gradient-background has-background-dim\"><\/span><img decoding=\"async\" class=\"wp-block-cover__image-background wp-image-466\" alt=\"\" src=\"data:image\/gif;base64,R0lGODlhAQABAIAAAAAAAP\/\/\/yH5BAEAAAAALAAAAAABAAEAAAIBRAA7\" data-src=\"https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/wp-content\/uploads\/sites\/71\/2021\/11\/lab-g1529039fe_1920.jpg\" style=\"object-position:16% 61%\" data-object-fit=\"cover\" data-object-position=\"16% 61%\" \/><noscript><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"1920\" height=\"1285\" class=\"wp-block-cover__image-background wp-image-466\" alt=\"\" src=\"https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/wp-content\/uploads\/sites\/71\/2021\/11\/lab-g1529039fe_1920.jpg\" style=\"object-position:16% 61%\" data-object-fit=\"cover\" data-object-position=\"16% 61%\" srcset=\"https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/wp-content\/uploads\/sites\/71\/2021\/11\/lab-g1529039fe_1920.jpg 1920w, https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/wp-content\/uploads\/sites\/71\/2021\/11\/lab-g1529039fe_1920-300x201.jpg 300w, https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/wp-content\/uploads\/sites\/71\/2021\/11\/lab-g1529039fe_1920-1024x685.jpg 1024w, https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/wp-content\/uploads\/sites\/71\/2021\/11\/lab-g1529039fe_1920-768x514.jpg 768w, https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/wp-content\/uploads\/sites\/71\/2021\/11\/lab-g1529039fe_1920-1536x1028.jpg 1536w, https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/wp-content\/uploads\/sites\/71\/2021\/11\/lab-g1529039fe_1920-272x182.jpg 272w\" sizes=\"auto, (max-width: 1920px) 100vw, 1920px\" \/><\/noscript><div class=\"wp-block-cover__inner-container is-layout-flow wp-block-cover-is-layout-flow\">\n<p class=\"has-text-align-center has-base-3-color has-text-color has-large-font-size wp-block-paragraph\">Sesi\u00f3n de laboratorio. Reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa<\/p>\n<\/div><\/div>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\" id=\"introduccion\">Introducci\u00f3n<\/h2>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">\u00a1Hola!<\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Es una alegr\u00eda encontrarnos en este espacio formativo, espero que sigas gozando de buena salud y de un excelente \u00e1nimo pues te ayudar\u00e1n bastante para completar esta Unidad de Aprendizaje que ya est\u00e1 entrando a su etapa final; te invito a tu clase 17 titulada Sesi\u00f3n de laboratorio: Reacci\u00f3n en Cadena de la Polimerasa de la UDA de Biolog\u00eda Molecular.<\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">En esta ocasi\u00f3n veremos una de las t\u00e9cnicas m\u00e1s utilizadas en el laboratorio de Biolog\u00eda Molecular, se trata de la reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa (PCR). Como se vio en la clase te\u00f3rica, esta t\u00e9cnica se utiliza para amplificar fragmentos de ADN y es una de las t\u00e9cnicas de rutina en el laboratorio. Adem\u00e1s, es la que posee una gran cantidad de aplicaciones y su uso se ha ido incrementando considerablemente. De ah\u00ed la importancia de que se adquiera el conocimiento y la pr\u00e1ctica necesaria para poder llevarla a cabo. En esta pr\u00e1ctica las condiciones de amplificaci\u00f3n que se utilizan pueden ser variables, esto va a depender de los oligos que se tengan disponibles, as\u00ed como del tipo de muestra con la que se cuente en el laboratorio. Es por eso que en el procedimiento se manejar\u00e1n condiciones est\u00e1ndar o incluso se har\u00e1 la indicaci\u00f3n de que temperatura emplear.<\/p>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Bueno, pues adelante \u00a1Comencemos la clase!<\/p>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\" id=\"desarrollo-del-tema\">Desarrollo del tema<\/h2>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Procedimiento:<\/p>\n\n\n\n<ol class=\"wp-block-list\"><li>Se ponen a descongelar todos los reactivos en hielo, incluida la muestra.<\/li><li>Se prepara la mezcla de reacci\u00f3n de la siguiente manera:<ul><li>Para 1 reacci\u00f3n:<ul><li>Regulador Minus &#8212;&#8211; 10X 2.5 \u00b5L<\/li><li>MgCl<sub>2<\/sub> 50 mM  &#8212;&#8211; 0.75 \u00b5L<\/li><li>Oligo sentido &#8212;&#8211; 1 \u00b5L<\/li><li>Oligo antisentido &#8212;&#8211; 1 \u00b5L<\/li><li>dNTP\u2019s &#8212;&#8211; 0.5 \u00b5L<\/li><li>Taq Polimerasa &#8212;&#8211; 0.1 \u00b5L<\/li><li>Agua de ampolleta est\u00e9ril &#8212;&#8211; 18.5 \u00b5L<\/li><li>ADN templado &#8212;&#8211; 1 \u00b5L<\/li><li>Volumen total de reacci\u00f3n &#8212;&#8211; 25 \u00b5L<\/li><\/ul><\/li><\/ul><\/li><\/ol>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Esto es para una sola reacci\u00f3n, dependiendo del n\u00famero de reacciones a realizar. Lo que se hace es preparar una mezcla madre de reacci\u00f3n en la cual se adicionan todos los reactivos excepto los oligos y la muestra de ADN. Una vez preparada la mezcla madre, esta se coloca en los diferentes tubos de reacci\u00f3n y posteriormente a cada tubo se le adicionan los oligos y la muestra de ADN. Si en todas las reacciones se van a utilizar los mismos oligos, estos se pueden adicionar a la mezcla madre. El objetivo de preparar una mezcla madre de reacci\u00f3n es el de disminuir el riesgo de contaminaci\u00f3n y el error por pipeteo. No te debes de olvidar de incluir siempre un control negativo y un control positivo de amplificaci\u00f3n. Esto es para verificar que la amplificaci\u00f3n obtenida sea exclusivamente debida a la muestra y no a que exista alg\u00fan tipo de contaminaci\u00f3n.<\/p>\n\n\n\n<ol class=\"wp-block-list\" start=\"3\"><li>Una vez preparados los tubos estos se colocan en el termociclador.<\/li><li>Se programan las condiciones de reacci\u00f3n con base en las caracter\u00edsticas de la muestra y de las temperaturas de alineamiento de los oligos. Se programan en el equipo las diferentes etapas de la reacci\u00f3n junto con sus temperaturas y tiempos. Se muestra un ejemplo de las condiciones de amplificaci\u00f3n para una reacci\u00f3n en general:<ul><li>Desnaturalizaci\u00f3n inicial: 94 \u00b0C por 4 min<\/li><li>30 ciclos:<ul><li>Desnaturalizaci\u00f3n 94 \u00b0C por 1 min,<\/li><li>Alineamiento: La temperatura y tiempo depender\u00e1 de los oligos que se utilicen.<\/li><li>Extensi\u00f3n 72 \u00b0C por 1 min<\/li><li>Extensi\u00f3n final: 72 \u00b0C por 7 min.<\/li><\/ul><\/li><\/ul><\/li><\/ol>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Cabe mencionar que estas condiciones pueden cambiar, dependiendo de las caracter\u00edsticas de los oligos y de la muestra de ADN.<\/p>\n\n\n\n<ol class=\"wp-block-list\" start=\"5\"><li>Una vez terminado el proceso de amplificaci\u00f3n, las diferentes muestras son analizadas por electroforesis en un gel de agarosa para verificar si hubo amplificaci\u00f3n o no y si el tama\u00f1o del fragmento amplificado es el esperado.<\/li><\/ol>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\" id=\"conclusion\">Conclusi\u00f3n<\/h2>\n\n\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">En conclusi\u00f3n, en esta clase pudiste practicar la realizaci\u00f3n de la reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa (PCR), t\u00e9cnica de utilidad en la amplificaci\u00f3n de fragmentos de ADN. Actualmente es una t\u00e9cnica que posee gran cantidad de aplicaciones por lo que es necesario conocerla. Durante la clase te has dado cuenta de la importancia de las condiciones necesarias para esta t\u00e9cnica de acuerdo con los reactivos utilizados en la misma adem\u00e1s de que tambi\u00e9n se requiere realizar una manipulaci\u00f3n correcta de las micropipetas puesto que se utilizan vol\u00famenes muy peque\u00f1os para estas reacciones.<br>Hemos concluido la clase y como puedes notar has avanzado mucho durante el trayecto del curso \u00a1Muchas felicidades! Para que puedas alcanzar el aprendizaje esperado en esta clase te invito a repasar los temas y conceptos revisados, adem\u00e1s realiza el reporte correspondiente y responde las preguntas incluidas en \u00e9l, no te olvides de enviarlo antes de la fecha l\u00edmite. Te encuentro en tu \u00faltima clase.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Introducci\u00f3n \u00a1Hola! Es una alegr\u00eda encontrarnos en este espacio formativo, espero que sigas gozando de buena salud y de un excelente \u00e1nimo pues te ayudar\u00e1n bastante para completar esta Unidad de Aprendizaje que ya est\u00e1 entrando a su etapa final; te invito a tu clase 17 titulada Sesi\u00f3n de laboratorio: Reacci\u00f3n en Cadena de la &#8230; <a title=\"Clase digital 17. Sesi\u00f3n de laboratorio. Reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa\" class=\"read-more\" href=\"https:\/\/blogs.ugto.mx\/rea\/clase-digital-17-sesion-de-laboratorio-reaccion-en-cadena-de-la-polimerasa\/\" aria-label=\"Leer m\u00e1s sobre Clase digital 17. Sesi\u00f3n de laboratorio. 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