Sesión de laboratorio. Extracción de ADN plasmídico
Introducción
¡Hola, qué momento más grato el poder saludarte!
Es un orgullo que continúes como estudiante de este curso. Espero que sigas perseverando hasta el final, por lo pronto te invito a revisar esta octava clase titulada Sesión de laboratorio: Extracción de ADN plasmídico de la UDA de Biología Molecular.
En esta ocasión la sesión será práctica-presencial en el laboratorio. El objetivo de esta sesión práctica es que conozcas el procedimiento mediante el cual se realiza la extracción de ADN plasmídico, así como el fundamento de la técnica. La técnica que vamos a utilizar es la de lisis alcalina, la cual, es una de las más utilizadas para extraer ADN plasmídico.
De modo que, en este contexto, ¡Comencemos la clase!
Desarrollo del tema
Procedimiento:
- Se cosechan las células centrifugando a 13 000 rpm durante 5 minutos. Se desecha el sobrenadante. Esto se repite hasta terminar con los 5 mL del medio de cultivo.
- Se agregan 100 µL de la solución I (fría) y se resuspende la pastilla en el VORTEX.
- Se adicionan 200 µL de la solución II. Los tubos se agitan suavemente por inversión y se dejan reposar a temperatura ambiente entre 3-5 min, cuidando de no exceder de 5 min.
- Se adicionan 150 µL de la solución III con la finalidad de detener la reacción de lisis. Se mezcla suavemente por inversión y se deja reposar en hielo por 5 min.
- Se centrifuga a 13 000 rpm de 10 a 15 min.
- El sobrenadante se pasa a tubos nuevos y estériles cuidando de no llevarnos nada de la pastilla.
- Al sobrenadante obtenido se le agregan 2 volúmenes de isopropanol, se mezcla por inversión y se deja reposar a -20 °C durante 30 minutos. Se descongela a temperatura ambiente y se centrifuga a 13 000 rpm durante 10 min.
- Se desecha el sobrenadante y se lava la pastilla con 1 mL de etanol al 70 %.
- Se centrifuga a 13 000 rpm por 5 min. Se retira el sobrenadante y se deja secar la pastilla a temperatura ambiente.
- Por último, la pastilla se resuspende en 10 µL de agua de ampolleta estéril.
Conclusión
Como mencionamos al inicio del curso, en los organismos todas las funciones celulares son controladas mediante la información que se encuentra codificada en el ADN, por lo cual resulta interesante conocer su composición y de aquí surge también la importancia de aislarlo para su estudio.Hay diferentes técnicas que nos permiten aislar ADN plasmídico siendo uno de los métodos más usados el de extracción por lisis alcalina, mismo que conociste durante esta clase.
Por el momento solo me resta decirte: ¡Felicidades, has concluido un tema muy interesante! No olvides la tarea, recuerda enviarla en tiempo y forma. Nos vemos en la siguiente clase.