Sesión de laboratorio. Electroforesis en gel de agarosa
Introducción
¡Hola!
Me complace enormemente saber de ti, espero que compartas mi emoción y te sumes con gran actitud y ánimo a esta clase 12 titulada Sesión de laboratorio: Electroforesis en gel de agarosa de la UDA de Biología Molecular.
En esta sesión de laboratorio conocerás uno de los procedimientos más utilizados para separar ácidos nucleicos: la electroforesis en gel de agarosa. Esta técnica permite separar fragmentos de ADN con base en su tamaño, y para ello se utiliza una matriz semisólida (gel de agarosa) y un flujo de corriente.
Como recordarás, el ADN posee carga negativa a un pH de 7.5 a 7.8 por lo que, si se pone en un campo eléctrico, este migrará al polo positivo. Es en esto en lo que se basa la técnica, además de que las diferentes moléculas de ADN se van a ir quedando atrapadas en la red creada por el gel, entre mayor tamaño tenga el fragmento, más lentamente migrará en el gel.
La electroforesis en gel de agarosa se utiliza mucho en el laboratorio para verificar la integridad de los fragmentos, así como para visualizar el resultado de otras técnicas, como la extracción de ADN o la PCR. De ahí su importancia.
Para la realización de la práctica se va a utilizar la muestra de ADN plasmídico obtenida en la sesión de laboratorio anterior. Sin más que agregar te invito a adentrarnos en el estudio de la electroforesis.
¡Comencemos!
Desarrollo del tema
Procedimiento:
Para la realización de esta práctica se necesitarán los siguientes reactivos:
- Agarosa
- TAE 50X (1 L)
- Tris base —– 242 g
- Ácido acético glacial —– 57.1 mL
- EDTA 0.5 M pH 8.0 —– 100 mL
- TAE 1X (1L)
- TAE 50X —– 20 mL
- Agua destilada —– 980 mL
- Buffer de carga
Marcador de tamaño
- Primero se prepara el gel de agarosa a la concentración deseada. En esta práctica lo vamos a utilizar al 1.2 %, si se requiere una mayor concentración de agarosa, lo que se tiene que hacer es ajustar la cantidad de la misma dependiendo del volumen de gel se que va a preparar. Para 25 mL al 1.2 % de agarosa las cantidades son las siguientes:
- Agarosa —– 0.30 g
- TAE 1X —– 25 mL
- Para ayudar a la disolución de la agarosa, la solución se calienta en el microondas en ciclos cortos, esto para evitar que ebulla la solución.
- Una vez completamente disuelta la agarosa, se adicionan 0.5 µL de Bromuro de etidio, cuidando que la solución no se encuentre muy caliente antes de adicionar el bromuro.
- Se prepara el portagel y se vacía en él la solución. Se deja enfriar hasta que se gelifique.
- Una vez gelificado, se coloca en la cámara de electroforesis y se cubre con la solución de TAE 1X.
- Las muestras se colocan en cada uno de los pozos del gel. Para ello, la cantidad de muestra que se va a cargar se mezcla con el buffer de carga. En el primer pozo se coloca el marcador de tamaño.
- Una vez cargadas todas las muestras, se tapa la cámara y se conecta a la fuente de poder. El voltaje se establece dependiendo del tamaño de la cámara y las características de la muestra.
- Una vez terminada la corrida, el gel se visualiza en el fotodocumentador bajo luz ultravioleta
Conclusión
¿Te ha resultado interesante este tema?
En conclusión, recuerda que la electroforesis en gel de agarosa es de utilidad en la parte experimental ya que nos permite verificar la integridad de los fragmentos de ADN.
Ahora que has concluido la práctica, ¡Te felicito por tu logro! y te invito a continuar con tu proceso formativo realizando el reporte correspondiente y respondiendo las preguntas incluidas en él. No olvides de enviarlo en tiempo y forma. “Perseverar es sinónimo de tenacidad, no decaigas sigue perseverando en tu educación” Te encuentro en la siguiente clase. Hasta luego.
Una vez concluida la práctica, realiza el reporte correspondiente y responde las preguntas incluidas en él. No te olvides de enviar tu reporte antes de la fecha límite.